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Post by alamin44710 on Aug 14, 2023 5:49:04 GMT -6
品中最重要的基因。 CON(分量 1)如图 2 A(左图)所示的单个(样本)图所示,其中 DMD 样本为黑色,CON 样本为浅灰色。mixOmics vip 程序的结果用于进一步选择最佳基因,方法是使用 vip 分数过滤高于 1.0 的成分 1,并要求变量(基因)图中的 x 位置大于 y 位置,如图 2 所示A(右图)。然后,在 DMD(红色)或 CON(蓝色)样本中选择为上调的最终一组基因与热图中欧几里得距离的 ward.D 聚类进行聚类(图 2B,与图 2 中的红色/蓝色 颜色相同) 行上为 A,列上为 黑色/灰色)。热图总共显示了 323 个基因,其中 DMD hiPSC-fibs 患者中增加了 159 个基因,CON hiPSC-fibs 患者中增加了 164 个基因。DMDDead Yellow (Invitrogen)一起孵育来评估活力。以下 C级执行名单同型对照小鼠 IgG1k BV421、小鼠 IgG1k PE、小鼠 IgG1k FITC 和小鼠 IgG1k APC 用于补偿设置。样品在 LSR Fortessa (BD Bioscience) 上采集。使用FlowJo (TreeStar)进行流式细胞术数据的分析。 表3 用于流式细胞术的抗体 全尺寸桌子 免疫荧上培养的 iPSC-CF 固定在 4% 多聚甲醛中,并用 Triton 0.1% (Sigma) 透化。将细胞封闭 1 小时 30 秒,并用一抗孵育 1 小时(表3) 室温,然后二抗 1h30。随后,(1:400,A12381;Thermo Fisher Scientific)一起孵育以对 F-肌动蛋白进行染色 。洗涤步骤后,用 DAPI 标记细胞并使用荧光封固剂封固剂(Invitrogen)封固载玻片。图像是使用 LSM900 共焦激光扫描显微镜使用 × 63 油浸物镜拍摄的。对每种条件下的 5-6 张图像进行免疫荧光定量。使用斐济的平均荧光强度 (MFI) 进行鬼笔环肽和胶原蛋白定量。在斐济使用 MiNA(线粒体网络分析)工作流程进行线粒体网络分析量化,分析“网络”和“线粒体足迹”。 统计数据 数据来自三名独立的 DMD 患者和健康捐赠者。结果表示为平均
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